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    蛋白質(zhì)與國產(chǎn)ELISA試劑盒相互作用的研究

    發(fā)布時間: 2019-01-18  點擊次數(shù): 1792次

    國產(chǎn)ELISA試劑盒與蛋白質(zhì)是生命活動的執(zhí)行者,細胞內(nèi)的生理變化都是通過蛋白質(zhì)來實現(xiàn)的。但是生命活動中各項功能和行為不是由單一的蛋白質(zhì)來完成的,需要蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì),蛋白質(zhì)與核酸之間的相互作用來實現(xiàn)的。蛋白-蛋白互作網(wǎng)絡與轉錄調(diào)控網(wǎng)絡對調(diào)控細胞及其信號有重要意義。于是對于蛋白之間相互作用的研究也變的很重要,關于研究方法也是層出不窮。

     在我們實驗研究的過程中主要用到以下幾種技術:
    1.酵母雙雜交(Y2H)
    2.Pull-down技術
    3.免疫共沉淀技術(Co-IP)
    4.亞細胞共定位技術
    5.噬菌體展示技術(PDT)
    6.熒光共振能量轉移技術(FRET)
    7.雙分子熒光互補技術(BIFC)

    其中實驗室比較常用的研究方法主要是前三種。這里對酵母雙雜交技術略作介紹和評述。

    原理:
    酵母雙雜交系統(tǒng)由Fields和Song等首先在研究真核基因轉錄調(diào)控中建立的。酵母的半乳糖苷酶基因的轉錄激活因子GL4有兩個獨立的結構域 :N末端的DNA結合域(BD)和C末端的轉錄激活域(AD)。BD與DNA分子結合,AD激活下游基因的轉錄,國產(chǎn)ELISA試劑盒只有兩者在空間上充分接近才能激活下游基因的轉錄。于是將要研究的兩個蛋白分別與BD和AD融合,如果兩個蛋白有相互作用則AD和BD在空間上會接近進而激活下游報告基因的轉錄。

    操作步驟:
    (1)首先構建已知蛋白的cDNA序列為誘餌,與DNA結合域融合(2)將待篩選的蛋白的cDNA序列與轉錄激活域融合,構建成文庫質(zhì)粒(3)將這兩個質(zhì)粒共轉化到酵母細胞中(4)通過檢測下游報告基因的表達篩選或確認蛋白相互作用。

    優(yōu)缺點:
    優(yōu)點:是可以在文庫中可以高通量篩選與目的蛋白相互作用的蛋白缺點:是假陽性多,還需要其他方法相互印證,國產(chǎn)ELISA試劑盒不適用于所有的蛋白

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